鸿运国际旗下的BCA(双环戊二酸)法是一种广泛应用于生物医学领域的蛋白质定量检测方法。它的原理在于蛋白质与铜离子在碱性环境中发生络合反应,从而生成一种稳定的紫红色复合物。通过与标准曲线进行比较,能够迅速求出待测蛋白的浓度。此方法以其高灵敏度、高准确性、操作简便及强抗干扰能力深受科研人员的喜爱。
1. 试剂准备
(1)BCA工作液:按50:1的比例将BCA试剂A和B混合,搅拌均匀,备用。
(2)标准蛋白溶液:选取适量的标准蛋白,使用PBS或去离子水进行溶解,制备成浓度为1mg/mL的标准蛋白溶液。
2. 蛋白样品制备
(1)细胞裂解:对细胞样品进行离心,去除上清液后加入适量细胞裂解液,在冰上裂解30分钟,以确保细胞充分裂解。
(2)去除杂质:对裂解后的样品进行离心,去除沉淀并保留上清液;向上清液中加入适量的SDS,使终浓度达到0.1%,混匀。
(3)标准曲线制备:取适量标准蛋白溶液,添加适量SDS,使浓度达到0.1%。依次稀释成不同浓度的标准蛋白溶液,并在96孔板中加入每种浓度的样品,每个浓度设置3个复孔。向每个孔中加入BCA工作液,混合均匀,并按照说明书要求在特定波长下测量吸光度,绘制标准曲线。
3. 蛋白定量检测
(1)取适量待测蛋白样品,添加适量SDS,使终浓度达到0.1%,充分混匀后加入BCA工作液,测量吸光度值。
(2)根据标准曲线查找待测蛋白样品的浓度。如果浓度较高,可以进行适当稀释后再进行测定。
注意事项
1. BCA工作液应在4℃避光保存,避免反复冻融。
2. 在实验过程中,保持样品和标准蛋白溶液的pH值一致,以确保结果准确。
3. 避免交叉污染,以免影响实验结果。
4. 对于某些特殊蛋白质样品,可能需要采用其他方法进行定量检测。
在生物医疗研究领域,鸿运国际致力于提供优质的实验解决方案,与科学界携手共同推动科研进展。